本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种I型和V型胶原蛋白的制备方法。主要技术方法如下：将去除鱼鳞及皮下组织的鱼皮，清洗，沥干，剪碎，烘干，粉碎后浸泡于0.1 M NaOH溶液，搅拌后离心取沉淀，洗至接近中性，然后置于预冷水中，加入乙酸和胃蛋白酶后搅拌，离心取上清液，加入NaCl后盐析，离心将沉淀溶解于含NaCl的Tris?HCl缓冲液中，离心后取上清液，再加入NaCl盐析，离心后分别收集沉淀和上清液：（1）将沉淀溶解，透析，冻干，即得I型胶原蛋白；（2）上清液中再加入NaCl后盐析，离心后取沉淀，溶解，透析，冻干，即得V型胶原蛋白，所有操作均在4°C下进行。本发明利用分级盐析的方法制备I型和V型胶原蛋白，工艺简单，可操作性强，成本低，效率高。