本发明提供了一种萃取和发酵耦合分离发酵液中乙醇的方法。该方法为：将糖或/和可溶性无机盐溶解于乙醇发酵液中，得含糖混合液；向含糖混合液中加入有机溶剂，振荡混合，在15～40℃下静置或离心至分相，得到上层的有机相和下层的水相共存体系；回收有机相中的乙醇，得乙醇产品；水相，去除有机溶剂，加入水稀释至糖浓度为40～300g/L，残留有机溶剂的浓度为小于5g/L，接入菌种，进行乙醇的发酵。本发明的方法操作简单、分离能耗低、实现了发酵与分离的耦合，水相直接用于发酵，不需要回收，减少了废水的排放，对乙醇一次萃取的回收率达到60％以上，是一种具有工业应用前景的从发酵液中分离乙醇的方法。