本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种红林蚁乙酰胆碱酯酶（AChE）基因、所编码的红林蚁乙酰胆碱酯酶（AChE）、制备该酶的方法。红林蚁AChE基因及所编码的红林蚁AChE，其碱基序列及氨基酸序列如序列表所示。该酶的制备方法包括以下步骤：（1）构建并PCR扩增红林蚁AChE基因全序列；（2）构建红林蚁AChE全序列构建真核重组表达载体；（3）转化毕赤酵母宿主细胞，培养，诱导表达；（4）纯化。本发明通过通过实验证明，所制备的红林蚁AChE相较于现有的果蝇AChE具有更高的活性和灵敏度，因而在未来的农药检测试剂制备技术领域具有较好的应用前景。