本发明公开了一种检测金黄色葡萄球菌的DNA传感器及其制备与应用，属于致病菌快速检测技术领域。本发明利用金纳米粒子具有生物固定的作用，同时具有增强电化学电子传递速率的功能，制备一种电化学碳纳米管/金纳米粒子复合膜DNA传感器，可有效提高检测的灵敏度。本发明通过合成金黄色葡萄球菌特异性基因序列作为探针ssDNA，与互补目标ssDNA片段形成杂交体系，以亚甲基蓝作为杂交指示剂的检测技术，初步建立了对金黄色葡萄球菌检测的一种通用性好、高灵敏度和精确度的检验方法及其检测条件。