本发明属于人核酸体外检测技术领域，具体涉及人类13、18和21号染色体20个STR基因座的基因分型检测试剂盒。本发明首先设计了对分布于人类13、18、21号染色体上的20个STR基因座同时进行基因分型的复合PCR扩增系统，其中PCR扩增引物组为：SEQ ID No.1～SEQ ID No.40；本发明的基因分型检测试剂盒包括引物组合物容器、PCR反应母液容器；引物组合物容器包含引物SEQ ID No.1～SEQ ID No.40组合物贮存液。本发明实现了对20个STR基因座的单管扩增，各荧光通道内以及不同荧光通道内的STR基因座扩增均衡，分型图谱良好；而且可显著节省成本、人力和时间，提高工作效率。