一种大叶千斤拔的组织培养繁殖方法，包括如下步骤：(1)外植体的取材与消毒；(2)无菌试管苗的获取；(3)试管苗增殖培养；(4)试管苗壮苗培养；(5)试管苗生根培养；(6)试管苗炼苗移栽。该法以带芽茎段和去叶茎尖作为外植体，通过组织培养繁殖，能够缩短培养周期并快速繁殖出大叶千斤拔优质种苗。培养30d芽繁殖系数可达7.0倍，经过扩繁、壮苗和生根培养，组培苗生根率在92.5～95.5％，移栽基质后成活率在90.3～96.5％，有效解决了大叶千斤拔的规模化育苗问题。