本发明公开了一种基于超支化纳米复合物的双酚A增敏型免疫层析金标试纸条的制备方法，属于免疫学检测技术领域。本发明试纸条由样品垫、金标垫、包被膜和吸水膜依次粘贴组合到PVC底板上，其中，金标垫上涂覆有超支化纳米复合物增敏探针，包被膜上具有检测线和质控线，检测线上包被有双酚A包被抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG。本发明试纸条的制备方法包括超支化纳米复合物增敏探针的制备、金标垫的制备、包被膜的制备以及试纸条的组装等。本发明试纸条利用超支化金标抗体增敏探针代替常规的金标抗体，极大提高检测灵敏度，且操作简单、检测速度快，不需要专用仪器设备，成本低廉，非常适合于基层检验检疫工作中大批量样品中双酚A的快速检测。