本发明公开了一种马和骡共有特征性多肽及其在皮类和胶类中药马源性和骡源性成分检测中的应用，本发明所提供的特征性多肽的氨基酸序列如GASGPAGVR和GPSGEPGKPGDK所示，该多肽为马皮和骡皮胶原蛋白所特有。此外，本发明提供了一种马皮和骡皮的鉴别方法，包括采用胰蛋白酶处理皮，采用液相色谱‑串联质谱检测特征肽，从而鉴定皮是否是马皮或者骡皮。本发明还提供了检测胶类中药中马源性和骡源性成分的方法，包括采用胰蛋白酶酶切胶类中药，使特征性多肽从胶原蛋白中游离出来，采用液相色谱‑串联质谱检测，从而判断胶类中药中是否掺入了马源性成分或骡源性成分。该方法具有特征性强，灵敏度高，操作简单等优点，能够准确的鉴定胶类中药中是否含有马源性成分或骡源成分。