本发明提供了一种钴镍双金属硫化物有机磷农药生物传感器及其制备方法，包括碳糊电极和乙酰胆碱酯酶层，所述的碳糊电极表面的修饰层由内至外依次为Nafion‑NiCo2S4层、乙酰胆碱酯酶层和Nafion层；所述的NiCo2S4的制备方法为：以可溶性镍盐、可溶性钴盐溶解在含有阳离子表面活性剂的乙二醇中，通过溶剂热法制得钴镍双金属硫化物。本发明的生物传感器酶的固载能力好，具有高灵敏度和高稳定性。达到将乙酰胆碱酯酶固定在电极表面，从而构建有机磷农药生物传感器，该生物传感器可用于甲基对硫磷和对氧磷的检测。