本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种利用木糖诱导产生四氢嘧啶的基因工程菌及其构建方法与应用。所述菌株是在大肠杆菌染色体上异源表达来自伸长盐单胞菌中的ectABC基因簇，重构四氢嘧啶合成通路，构建无质粒系统，利用木糖启动子诱导来源于T7噬菌体的RNA聚合酶，同时结合T7强启动子系统启动目的基因高效表达，从而达到摇瓶发酵20‑28h后四氢嘧啶的产量达到了12‑16g/L，5L发酵罐发酵24‑40h后四氢嘧啶的产量达到了35‑50g/L的效果。