本发明公开了一种基于ACACB基因鉴定奶牛产奶性状的方法及其应用。本发明的鉴定奶牛产奶性状的方法是检测牛基因组17号染色体上第66218726位脱氧核糖核苷酸和/或第66218117位脱氧核糖核苷酸和/或第66199005位脱氧核糖核苷酸和/或第66167817位脱氧核糖核苷酸和/或第66102564位脱氧核糖核苷酸的基因型。通过试验证明：本发明的方法简便、快速、灵敏，结果可靠、稳定、准确，并可用于辅助鉴定具有优良产奶性状的牛群体，适合实验室大群体规模检测的需要。不仅可对待选牛进行早期筛选，而且降低了育种花费，能有效提高实际生产中的牛的产奶量，在牛的育种工作中将发挥巨大作用。