本发明提供一种细胞培养用SFL微载体的制备方法，包括以下步骤：（1）蚕茧脱胶；（2）配制纯丝素蛋白溶液；（3）采用W/O/O复乳法制备微球；（4）交联固化成球；（5）除油洗涤；（6）还原脱色；（7）洗涤。本发明还提供应用该方法制备得到的细胞培养用SFL微载体及其应用。本发明原料无毒性，采取W/O/O复乳法乳化成球，一定温度下交联固化，无需再次偶联修饰，得到的微载体表面呈多孔，比表面积大、生物相容性好、适合多种细胞培养使用。整个制备过程简单易行，方法可控，成本低廉，生物安全性高，易于工业化生产，本发明的微载体能够在搅拌状态下悬浮培养，适合于多种贴壁细胞大规模悬浮培养，具有广阔的市场前景。