本发明公开了一种游离肌动蛋白的提取方法，包括如下步骤：步骤一、从动物肌肉中提取肌动球蛋白，获得肌动球蛋白溶液，提取过程中保持各样品处于0～4℃温度状态；步骤二、对肌动球蛋白溶液进行超声处理，超声频率为20kHz，超声功率为50～350W，超声工作时间为1～3s，停歇时间为2～6s，超声处理持续10～30min；步骤三、从超声处理后的肌动球蛋白溶液中提取得到游离肌动蛋白溶液，处理后得到游离肌动蛋白。本发明通过超声处理肌动球蛋白溶液，促进了肌动球蛋白溶液的解离，以提取到较高浓度的游离肌动蛋白，且肌动蛋白的纯度也提高，满足了实验需求。