本发明公开了一种丝素荧光探针的制备方法。用丝素材料对噬菌体库进行筛选，得到与丝素蛋白特异性结合的噬菌体，进行基因测序，将测序获得的基因对应的氨基酸序列作为丝素亲和肽一级序列，通过多肽合成技术对丝素亲和肽一级序列进行多肽合成，得到丝素亲和肽粉，将丝素亲和肽粉和荧光素结合，得到丝素荧光探针。本发明所筛选的噬菌体对丝素材料具有很高的亲和性，探针灵敏度高，检测速度快，应用前景广泛，为丝素蛋白及丝素材料的高效靶向、鉴定提供更多的选择。