本发明公开了一种高效石斑鱼精子冷冻保存液及其使用方法，属于鱼类种质冷冻保存的技术领域。本发明包括稀释液和抗冻剂；所述稀释液为水溶液，所述稀释液中含有以下质量浓度的组分：葡萄糖10～20g/L、氯化钠7.5～8.5g/L、氯化钾0.6～0.7g/L；所述抗冻剂为1,2‑丙二醇，所述抗冻剂在所述保存液中的体积浓度为10～20％。本发明还给出上述保存液保存石斑鱼精子的使用方法，经过稀释液配制、抗冻剂配制、保存液预冷、精液稀释、平衡和分装、冷冻保存、解冻和受精七个步骤而完成。本发明的保存液成份简单，毒性低，易于配制，养殖技术人员容易掌握，冷冻活力高，具有广泛的通用性，提高了石斑鱼精子冷冻保存成活率。