本发明属于生物技术领域，公开了Ι群4型禽腺病毒具有免疫保护功能的亚单位蛋白，其为Ι群4型禽腺病毒短纤突蛋白球形区截短体蛋白，从氨基酸283位到氨基酸479位的抗原决定簇氨基酸序列，具有较好的抗原性和免疫原性。该Ι群4型禽腺病毒亚单位蛋白及药学上可以接受佐剂制成疫苗，该疫苗制备方法主要包括先将密码子优化后的Ι群4型禽腺病毒短纤突蛋白球形区截短体蛋白核苷酸序列克隆到载体中，再将重组载体转化、诱导表达、纯化后得到抗原蛋白，最后将抗原蛋白与佐剂乳化后得到疫苗。该疫苗安全、有效；且制备该亚单位疫苗的方法简单、成本低、易于放大。