本发明公开了一种高效诱导植物受体孤雌生殖单倍体筛选方法。本发明同时将胚特异性启动子ZmESP驱动荧光蛋白eGFP和胚乳糊粉层特异性启动子HvASP启动荧光蛋白DsRED双标记表达盒构成胚‑胚乳双荧光标记载体。基于此胚‑胚乳组织特异性双荧光标记的玉米、水稻、小麦和大麦孤雌生殖单倍体诱导系，可实现精确高效大规模单倍体鉴定筛选，在单倍体育种中具有独特优势。利用本发明的方法可以克服胚及胚乳颜色或油份含量筛选标记因遗传背景对籽粒花青素表达或油份含量影响的限制，实现稳定、高效筛选单倍体籽粒。本发明可应用于任何遗传背景下、任何颜色与油份的材料，克服了现有技术对受体的限制，对于双单倍体育种有重大意义。