本发明公开了一种南蛇藤中雷公藤内酯甲、雷公藤内酯乙含量的检测方法，包括：（1）雷公藤内酯甲、雷公藤内酯乙对照品溶液的制备；（2）供试品溶液的制备：南蛇藤药材粉碎（过四号筛），取1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25 mL，称定重量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）30 min，用乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；（3）色谱条件：流动相为乙腈：0.1%磷酸水=80：20；检测波长为203nm；流速：1.0 mL·min‑1；检测器：紫外；柱温：30℃；进样量：10µL。该方法简单，专属性强，重现性好，能够对南蛇藤药材的品质进行有效评价。