本发明公开了一组中华鳖性别鉴定的特异性引物及鉴别方法。本发明性别鉴定引物体系中的两对引物分别为一对雌性特异引物及一对利用雌雄基因组DNA均可扩增出的阳性参考引物。其中，雌性特异引物仅可在雌性基因组DNA中稳定扩增出一条196bp的条带，在雄性基因组DNA中无法扩增出条带；而阳性参考引物在雌雄基因组DNA中均可扩增出一条482bp条带。由此，在该PCR反应体系中，雌性基因组DNA能够扩增出196bp及482bp两条条带，而雄性仅可扩增出482bp一条条带。利用本发明的引物有利于正确进行中华鳖的性别鉴定，尤其是肉眼难以区分性别的胚胎期中华鳖的性别鉴定。为中华鳖的研究奠定了基础，也为中华鳖的养殖与人工选育提供了重要工具。