本发明提供一种高产L‑苹果酸的黑曲霉(Aspergillus niger)基因工程菌株。本发明还提供一种上述基因工程菌株的构建方法。该方法利用基因敲除技术破坏黑曲霉草酰乙酸水解酶基因(oahA)从而获得了苹果酸高产菌株S2。经过7天摇瓶发酵，可将100g/L的葡萄糖转化成120.4±2.8g/L L‑苹果酸，苹果酸对葡萄糖的转化率达到1.62mol/mol，达到理论最高转化率的81％。为苹果酸的工业化生产提供了优良的菌株。