本发明公开了一种利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法，包括以下步骤：S1从人脐带血获取CD34+CD90‑和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞；S2所述CD34+CD90‑和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞悬浮接种于脐带血造血干细胞专用转化培养基中培养，所述脐带血造血干细胞专用转化培养基采用StemSpan SFEM II无血清培养基，添加100ng/ml SCF，100ng/ml FLT3，50ng/ml TPO；24孔板中细胞接种密度为：CD34+CD90‑细胞为0.55x104/孔，CD34+CD45RA+细胞为0.13x104/孔；添加MS‑275 1μM；置于37℃,5％CO2培养箱培养。本发明的有益效果：利用人造血祖细胞制备的造血干细胞数量高，且具备各谱系分化潜能，能够为临床应用提供造血干细胞供体。