本发明公开了一种基于聚合酶螺旋反应恒温检测单增李斯特菌的引物、试剂盒及检测方法。该引物包括检测引物Ft和Bt；其中，检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了一种基于聚合酶螺旋反应恒温检测单增李斯特菌的试剂盒，该试剂盒包括上述引物，Bst DNA聚合酶，以及钙黄绿素和氯化锰的混合溶液等。利用上述引物或试剂盒能对单增李斯特菌进行聚合酶螺旋反应的检测，不会因温度的改变而造成时间损失，耗时短，反应过程简便、检测周期短、特异性强、可用肉眼观察检测结果。本发明对新型恒温扩增技术扩增的开发及微生物的现场检测具有重要的意义。