本发明公开了一种烟草外向整流钾离子通道基因NtSKOR1及其克隆方法与应用；所述的烟草外向整流钾离子通道基因NtSKOR1氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；克隆方法包括烟草叶片cDNA合成：提取烟草叶片总RNA，反转录得到第一链cDNA；NtSKOR1基因的PCR扩增：以烟草叶片cDNA为模板，根据NtSKOR1基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序。应用为所述的烟草外向整流钾离子通道基因NtSKOR1在调控烟草钾离子含量的转基因烟草植株中的应用。本发明利用CRISPR/CAS9技术对克隆的NtSKOR1基因进行了功能鉴定。烟草NtSKOR1基因的克隆鉴定为调控烟草钾含量提供了新的基因靶标。