一种快速检测微生物CO2呼吸率的凝胶试纸及其使用方法，属于环境化学与微生物学领域。该凝胶试纸的主要成分包含NaOH碱、酸碱指示剂、甘油和琼脂等，采用高量程和低量程两种测试范围，可以针对环境介质中的堆肥土壤样品进行CO2呼吸率检测。凝胶试纸的结果可读性高，通过与黄、橙、红、深红和紫五种颜色指示卡比较，可以迅速鉴定堆肥或土壤的呼吸作用，还可以指示堆肥五个水平的微生物活力或腐熟阶段。本发明试纸的灵敏度好、准确性高，高量程试纸的颜色变化范围匹配1‑50mg的CO2呼吸率，低量程试纸的颜色变化范围匹配0.1‑5mg的CO2呼吸率；使用方法简便快速，可以在30分钟时间内完成样品检测，且无需高价检测仪器。