本发明公开了一种多氨基表面活性剂及其制备方法与应用，该表面活性剂通过以下步骤制备：首先利用邻苯二甲酸酐与伯胺反应生成邻苯二甲酰亚胺对伯胺进行保护；然后利用溴代烷烃与仲胺反应，将长链烷基与氨基结合；最后在碱性条件下，利用钙盐的难溶解特征将邻苯二甲酸钙以沉淀方式除去，再除去溶剂后即可获得目标产品，所得产物为一种多氨基表面活性剂；该表面活性剂通过增加氨基数量从而提升表面活性剂的水溶性，同时保留了氨基对细菌表面负电荷的吸附作用以及长链烷基对细胞膜的破坏作用，应用在油田含油污水细菌处理，具有显著的效果。