本发明公开了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与CD2V和360‑505R双基因缺失疫苗株LAMP检测引物及其LAMP检测试剂盒，所述检测引物包括两套引物，一套引物针对非洲猪瘟病毒野毒株的CD2v序列，能特异性检测非洲猪瘟病毒野毒株；另一套针对双基因缺失疫苗株,引物的位置在于360‑505R基因27942‑35500位缺失区两侧，能特异性的检测出该非洲猪瘟疫苗株。该检测方法采用恒温反应的检测手段，仅需加热即可实现整个反应，可以实现快速现场检测，所述方法检测灵敏度高、特异性强、重复性好、检测速度快，可以作为有效的非洲猪瘟病毒野毒株与CD2v和360‑505R双基因缺失疫苗株的的基层检测手段。