本发明提供了一种丁酸梭菌的菌种保藏培养基及培养方法，该菌种保藏培养基由按质量百分比计的如下组分：麦芽糊精0.5～7％，蛋白胨0.1～5％、玉米浆0.1～3％，无水乙酸钠0.1～2％，氯化钠0.1～3％，余量为水，调pH值至7.0±0.1，再加入碳酸钙0.1～4％，115℃灭菌30min制备得到。本发明通过对培养基成分上的优化，使得丁酸梭菌由杆状营养体形态转化为稳定的芽孢休眠形态，有利于菌种的储存保藏，大大提高菌种储存保藏的质量。