本发明提供一种鲫造血器官坏死病灭活疫苗及其制备方法，该疫苗包括异育银鲫脊髓组织细胞系和鲤疱疹病毒Ⅱ型，并且异育银鲫脊髓组织细胞系的保藏编号为CCTCC NO：C2018211。制备方法包括以下步骤：培养异育银鲫脊髓组织细胞系；将培养的异育银鲫脊髓组织细胞系进行CyHV-2病毒扩增，获得CyHV-2病毒液；将CyHV-2病毒液进行灭活处理。本发明制备的疫苗免疫保护效果好，可应用于鲫造血器官坏死病的预防免疫，提高养殖鲫鱼的存活率和养殖效率。