本发明公开了莪术醇在制备NQO2蛋白抑制剂中的应用。本发明中发现莪术醇可直接与NQO2蛋白结合，抑制NQO2酶活，且发现NQO2蛋白的第126位、128位、161位或178位氨基酸突变丙氨酸后，NQO2与莪术醇不再结合且NQO2酶活性受到影响。因此，莪术醇可作为NQO2蛋白抑制剂，用于解决NQO2高表达所引起的肿瘤药物耐受方面的治疗。另外，本发明还提供了一种NQO2蛋白突变体，为NQO2蛋白的第126位，128位，161位和178位氨基酸中的至少一个氨基酸突变丙氨酸，为后续NQO2蛋白抑制剂或抗肿瘤药物方面的研究提供有效途径。