本发明提供了一种冻干保护剂、发酵剂及其制备方法和应用，涉及微生物发酵技术领域，所述冻干保护剂包括脱脂乳粉、罗望子多糖、聚葡萄糖和水，由上述原料制得的冻干保护剂能够有效减少冷冻干燥过程中冰晶对发酵菌体的损伤，同时罗望子多糖和聚葡萄糖不会引起血糖的升高，有效缓解了现有菌株保护剂容易引起的血糖升高的问题。进一步的，本申请发酵剂通过冻干保护剂的加入有效缓解现有植物乳杆菌Zhang‑LL在冷冻干燥过程中发酵菌株活力下降的问题，具有较佳的发酵性能，同时也不会引起血糖升高的问题。