本发明涉及一种纸基微流体芯片及其制备方法与应用，属于纸基芯片技术领域。该芯片的基底为亲水基底，在亲水基底表面的部分区域上固化有疏水材料，这些疏水材料用于围绕亲水基底上未被疏水材料覆盖从而暴露的亲水区域，使这些亲水区域具有疏水边界；亲水区域上具有纤维素悬浮液经脱水沉积形成纸基微流体通道。先制备疏水印章，将印章具有凹陷的一侧平铺在石蜡膜上，对石蜡膜进行加热转变成熔融状态；将印章置于亲水基底上，使熔融态石蜡固化在亲水基底表面，将纤维素悬浮液滴加到基底表面，即得到芯片。本发明中的芯片具有制作简单、成本低、制作基底多样性、通道分辨率高等优点，可以作为生物传感平台，广泛应用于资源有限条件下的即时检测。