本发明属于合金钢技术领域，具体涉及一种高强度高韧性25CrNi3MoVE钢、制备方法及其应用。所述钢的化学成分质量百分比为：C 0.22‑0.28％，Si≤0.3％，Mn 0.3‑0.6％，P≤0.012％，S≤0.006％，Cr 0.9‑1.2％，Ni 2.75‑3.2％，Mo 0.2‑0.3％，V 0.05‑0.15％，Cu≤0.2％，Al≤0.03％，Ti≤0.01％，其余为Fe和不可避免的杂质元素。经冶炼、精炼、浇注、缓冷、重熔、锻造、正火、淬火和回火处理后得到的钢同时兼顾高强度、高韧性和耐海水使用环境需求，可作为大尺寸船舶主轴材料使用。