本发明提供一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒及其制备方法，属于试剂盒领域。该试剂盒包括：沙门氏菌的apt‑Fe3O4@Ag NPs纳米探针、过氧化氢刻蚀剂、脲酶溶液和尿素/苯酚红试纸。本发明还提供一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒的制备方法。本发明利用免疫磁珠与纳米粒子复合结构对鼠伤寒沙门氏菌检测，利用酶抑制法通过试纸显色,缩短了检测时间,定量检测时变异系数小，最低检测浓度为21cfu·mL‑1,加标回收率达到96.18％,灵敏度高,稳定性好。