一种基于双机理的用于检测ONOO-的荧光探针及其制备方法和应用，属于荧光探针检测技术领域，目的在于提供一种基于双机理测定ONOO-的荧光探针及其制备方法和应用。称取2-氨基苯硫醇和4-（二乙胺基）水杨醛溶解在10mL无水乙醇溶液中，然后加入浓盐酸和过氧化氢溶液。在室温下搅拌，加入10mL二次水进行淬灭，过滤得到粗产物，然后将粗产物在乙醇溶液中重结晶，得到黄色固体；将得到的固体、碳酸钾和4-溴甲基苯硼酸频哪酯加入到DMF溶液中，反应5小时后，用旋转蒸发仪旋干，柱层析分离纯化后即得到目标产物。所得到的探针在水溶液中具有良好的溶解度和分散性，并且可以用来检测ONOO-和内源性细胞成像。