一种金纳米棒单层膜基底的制备方法，属于金纳米棒单层膜的制备技术领域，可解决现有在基底上制备的二维金纳米棒单层膜较松散而且制备过程复杂的问题，本方法集合了金纳米棒诱导自组装、电泳以及溶剂蒸发步骤，制备工艺简单，成本低廉，能够实现金纳米棒单层膜基底稳定制备的方法。克服了传统单一自组装模式下基底覆盖率低，易堆叠等缺点，按本发明的制备方法制成的金纳米棒单层膜基底上金纳米棒排列紧密，覆盖率高达86.5%，通过对金纳米棒长径比的调控实现了表面等离子共振峰在可见-近红外区的精细调节，从而具有优良的表面拉曼增强特性和双光子激发荧光增强特性，在分子的高灵敏度检测和生物检测领域具有很大的应用前景。