发明人提供了两种用于纯化他克莫司的层析柱及其纯化方法，在层析柱中，由于上层的层析介质中混杂了石墨烯，石墨烯中具有的共轭π电子，可以吸附他克莫司侧链上的存在不饱和π键的烯烃结构，而他克莫司的两个主要类似物杂质：二氢他克莫司和子囊霉素，在并没有烯烃或其他不饱和π键结构，可被层析柱分离。同时还能通过本发明的纯化方法在层析柱上分离色素以及他克莫司另外一个微量同系杂质8-epi tacrolimus，该杂质的结构和他克莫司一样，有同样的侧链，但侧链上是手性翻转的，解决了行业内的技术难题。