本发明提供了一种肾细胞癌肿瘤抗原CA9特异性细胞毒性T淋巴细胞制备方法，包括以下步骤：将含靶向SOCS1的siRNA和碳酸酐酶9的重组载体感染成熟DC细胞，得到iSOCS1-CA9-DC细胞；然后将iSOCS1-CA9-DC细胞与T细胞混合培养，获得CA9-DC-CTL细胞，即具有抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞。本发明采用复制缺陷型腺病毒介导RNAi下调SOCS1基因表达，联合CA9及S-Flagellin刺激DC细胞成熟，诱导特异性的CTL抗肾细胞癌。有效的增强了CTL对肾癌细胞的靶向性，避免对自体细胞的损伤，可以有效的抑制肿瘤的生长，延长患者生存期。