本发明公开了一种鼠李糖乳杆菌菌株D2及其制备方法和用途，该鼠李糖乳杆菌菌株D2的保藏登记号为：CGMCC No:20158。该鼠李糖乳杆菌菌株D2在MRS液体培养基中，能耐受14％的酒精，且能产出20.03g/L的总酸(以乳酸计)、17.23g/L的乳酸、1.07g/L的苹果酸，具有良好的耐酒精性能和产酸能力。该菌株D2是从果醋生产过程中的醋醅经分离、筛选得到，适应果醋的生产发酵环境；将其用于果醋酿造，能使果醋原液的总酸含量提高到41.38g/L、乳酸含量达到5.02g/L、苹果酸达到0.45g/L；有效减少果醋酸味的刺激性，改善果醋口感。