本发明公开了一种β-乳球蛋白的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法，属于生物免疫分析领域。该方法以玻碳电极为基础电极，并对其进行聚合和活化预处理，采用聚酰胺-胺树枝状大分子结合多壁碳纳米管修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，经吸附作用固定于修饰电极上，β-乳球蛋白抗体通过修饰过的电极更好地与在电极表面的羧基进行结合固定，制备成纳米免疫传感器。该方法灵敏度高、精确度高、特异性强，可用于检测乳制品中的β-乳球蛋白，在抗原性检测领域具有广阔的应用前景。