本发明公开了一种测定阿莫西林克拉维酸钾相关物质的色谱检测方法，以磷酸二氢钠缓冲液为流动相A，以磷酸调节pH值至3.64；以磷酸二氢钠缓冲液和甲醇的混合液为流动相B，磷酸二氢钠缓冲液与甲醇的体积比为10:90；按线性梯度洗脱进行液相色谱检测；测定阿莫西林以及阿莫西林相关的19项杂质，测定克拉维酸钾以及克拉维酸钾相关的6项杂质。本发明提供的测定阿莫西林克拉维酸钾相关物质的色谱检测方法，通过改进色谱检测条件，本发明可同时检测涉阿莫西林及其杂质共20个、克拉维酸钾及其杂质共有7个，检测效率较高。