本发明公开了一种提高灵芝多糖含量的灵芝菌丝体培养方法，包括制备灵芝菌丝体PDA种子、制备灵芝菌丝体液体种子和发酵培养灵芝菌丝体。其中发酵培养灵芝菌丝体具体为先制备发酵培养基并灭菌，然后在摇床中培养，培养条件：接种量4%、温度28℃、转速160rpm/min，先培养2.5天，后流加10g灭菌的黄豆粉，再培养两天结束发酵，收集灵芝菌丝体，并对灵芝菌丝体提取灵芝多糖。通过该方法获得的灵芝菌丝球较小、数量更多，发酵周期更短、灵芝多糖含量更高，显著降低了工业化生产成本、提高了企业的经济效益。