本发明属于药物靶标筛选领域，具体涉及一种猪链球菌c‑di‑AMP合成酶抑制剂的筛选方法及其应用。基于化学发光方法，根据反应体系中相对发光值大小反映DacA酶活性。反应体系是由猪链球菌SC19 c‑di‑AMP合成酶功能结构域DacA(99‑283)、ATP、酶活反应缓冲液和Reagent组成。根据高通量筛选判定标准，计算了化学发光法的Z值、信号与背景的比值以及阴、阳试验组信号值的变异系数平均值，本发明符合高通量筛选标准。利用本发明的对药库的筛选鉴定出1种化合物即抑制剂IPA‑3对猪链球菌c‑di‑AMP合成酶有抑制作用以及猪链球菌革兰氏阳性细菌具有抑制作用。