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公开(公告)号：CN114717253A
公开(公告)日：2022-07-08
申请号：CN202210408450.9
申请日：2022-04-19
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌高效转座突变系统，所述转座突变系统，即pSET4s‑Tn质粒，包括：(一)猪链球菌温敏复制元件Ts ori；(二)大肠杆菌复制元件ColE1ori；(三)Mariner转座酶表达盒；(四)壮观霉素抗性表达盒(SpcR)；(五)上游和下游均包含一个转座酶识别序列(IR)的红霉素抗性表达盒(ErmR)。利用该转座突变系统可实现在猪链球菌中的高效转座突变，在单次实验中能够达到98％以上的猪链球菌为转座突变体，转座子插入在猪链球菌基因组中TA碱基位点，且转座插入位点无明显偏好性。
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公开(公告)号：CN110951784A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911385470.3
申请日：2019-12-29
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/90 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种无标记猪β-防御素2基因定点敲入质粒载体及其应用。本发明与转基因动物领域相关。构建了能表达双拷贝pbd-2基因的供体质粒pcCAG-R26-PBD2-T2A-PBD2，该供体质粒还含有双侧带有loxP序列的新霉素抗性基因neoR表达盒。试验证明，将该质粒与能同时表达Cas9蛋白与靶向猪Rosa26位点的向导RNA的打靶质粒pX330-pRosa26同时电转入受体细胞，实现了pbd-2基因定点整合入猪的Rosa26位点，并通过Cre重组酶删除了抗性标记，经体细胞核移植及胚胎移植能够得到无抗性标记的pbd-2基因定点敲入猪。
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公开(公告)号：CN110432140A
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201910767573.X
申请日：2019-08-20
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种快速发掘柑橘四倍体的方法，属于植物多倍体育种技术领域。本发明方法根据柑橘根系、叶片和油胞的形态特征筛选疑似四倍体，与二倍体相比，四倍体的根系短粗、侧根少，四倍体的叶片厚、宽、颜色深，四倍体的油胞大、密度低；筛选疑似四倍体再用流式细胞仪进行倍性鉴定。本发明结合对根、叶和油胞的形态特征进行初选，获得四倍体的准确率可达85％以上，且用时短、操作简单；通过本发明方法获得的四倍体植株倍性稳定，不存在嵌合体。
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公开(公告)号：CN109609508A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910055536.6
申请日：2019-01-22
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/12 , A61K48/00 , A61P31/04 , A61K31/713 , A61K38/17
摘要： 本发明属于动物传染病和动物转基因技术领域，具体涉及猪β-防御素2基因在抗副猪嗜血杆菌病中的应用。将猪β-防御素2(PBD-2)基因片段在猪体内过量表达，能显著提高转基因猪对副猪嗜血杆菌的抵抗力，表现为过量表达PBD-2能够显著降低副猪嗜血杆菌感染引起的临床症状和大体病变程度，显著降低副猪嗜血杆菌感染造成的猪肺和脑的组织病变程度以及在感染猪肺组织和脑组织中的细菌载量。本发明首次发现了在猪体内过表达PBD-2基因能提高猪对副猪嗜血杆菌的抵抗力，表明PBD-2基因能够作为制备抗副猪嗜血杆菌的转基因家畜的候选基因。
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公开(公告)号：CN108866069A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201810840026.5
申请日：2018-07-27
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/12 , C12N15/85 , A01K67/027
摘要： 本发明属于动物传染病和动物转基因技术领域，具体涉及猪β‑防御素2基因在抗猪流感中的应用。将猪β‑防御素2(PBD‑2)基因片段在猪体内过量表达，能显著提高转基因猪对猪流感的抵抗力，表现为过量表达PBD‑2能够显著降低猪流感病毒在感染猪肺组织中的病毒滴度及猪流感病毒感染造成的猪肺部病变程度。通过合成或重组的PBD‑2，也可以有效抑制猪流感病毒的复制，本发明可通过体外表达或合成PBD‑2制备多肽类药物或饲料添加剂。
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公开(公告)号：CN102321627B
公开(公告)日：2013-07-03
申请号：CN201110191074.4
申请日：2011-07-08
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/12
摘要： 本发明公开了一种人源TRIM25基因抑制口蹄疫病毒细胞株的制备方法和应用，其步骤：A、hTRIM25基因的获取：参照人源TRIM25基因序列，设计一对引物；B、真核表达载体pCA-hTRIM25eGFP的构建：通过EcoRI和XhoI将hTRIM25连入pCA载体，获得pCA-hTRIM25。然后用SalI和XhoI分别酶切pEGFP-C1和pCA-hTRIM25，回收载体pEGFP-C1和含有启动子和hTRIM25片段并用T4ligase连接，提取重组质粒，分别通过EcoRI和HindIII酶切鉴定；C、稳定表达hTRIM25基因的BHK21-hTRIM25eGFP细胞株的构建：通过脂质体法Lipofectamine2000将pCA-eGFP和pCA-hTRIM25eGFPG转染BHK-21细胞，转染后筛选，通过间接免疫荧光和Westernblotting鉴定hTRIM25蛋白的表达，为BHK21-hTRIM25eGFP。该株在制备治疗或预防FMDV药物中的应用。构建的BHK21-hTRIM25eGFP细胞株能稳定表达hTRIM25蛋白；稳定表达hTRIM25基因的细胞株BHK21-hTRIM25eGFP能够抑制口蹄疫病毒复制；hTRIM25基因用来构建转基因小鼠和转基因猪等转基因动物。
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公开(公告)号：CN102443053B
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201010509839.X
申请日：2010-10-15
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C07K14/315 , C12N15/31 , C12N1/21 , A61K39/09 , A61P31/04 , G01N33/569 , C12R1/19
摘要： 本发明属于兽医微生物学和动物传染病技术领域。具体涉及猪链球菌2型的一个具有免疫原性蛋白基因的分离、克隆表达它所编码蛋白中的胞外肽段以及重组蛋白在疫苗和诊断中的应用。本发明从猪链球菌2型强毒株SC-19菌株中分离得到一个新的具有免疫原性的蛋白基因hp0245；其中编码胞外肽段的DNA(hp0245EC)具有如序列表SEQ ID NO：1所示核苷酸序列，编码261个氨基酸。重组蛋白HP0245EC保留了原始蛋白免疫原性的特点；对小鼠感染猪链球菌2型SC-19菌株能提供有效的免疫保护力，具有潜在的疫苗应用价值。本发明还包括猪链球菌2型HP0245-ELISA诊断试剂盒的构成和制备方法，以及克隆hp0245EC大肠杆菌DH5α/SS2 hp0245EC的制备，该重组大肠杆菌已保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏编号为CCTCC NO：M2010258。
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公开(公告)号：CN102559531A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201010596059.3
申请日：2010-12-15
申请人： 武汉科前动物生物制品有限责任公司 , 华中农业大学
摘要： 本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一种适用于副猪嗜血杆菌5型的高密度发酵培养基，其包括下列组分：按照重量/体积计，谷氨酸钠1～10g/L，酵母粉5～50g/L，氯化钠1～10g/L，无水磷酸二氢钾0.063～2.502g/L，三水磷酸氢二钾0.351～14.044g/L；按体积比计牛血清5～40％，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)1～10‰，余量是水。本发明有利于副猪嗜血杆菌5型的高密度发酵，菌体生长速度快，能获得较高菌量，培养后的副猪嗜血杆菌5型活菌数可达到50亿。本发明的培养基材料来源广泛，成本低廉，可有效扩增副猪嗜血杆菌5型，能满足大规模疫苗生产的需要。
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公开(公告)号：CN101265457B
公开(公告)日：2011-01-26
申请号：CN200710052792.7
申请日：2007-07-20
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于动物细菌基因工程领域，具体涉及一种区分疫苗免疫和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型双基因缺失突变株的构建、疫苗及应用。本发明得到一株区分疫苗免疫动物和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型基因缺失突变株APP-7-mut01(保藏号为CCTCC NO：M207004)。该株缺失APP血清7型两个主要的毒力因子apxIIC和apxIVAN基因。突变株对猪安全，且具良好免疫原性的毒素ApxIIA和ApxIVAC蛋白，保证了疫苗的免疫效力。用突变株的疫苗免疫动物，动物体内不再产生针对Apx IVAN蛋白抗体，而野毒猪感染的产生针对ApxIVAN蛋白抗体。本发明还公开了利用该双基因缺失突变株构建，疫苗制备及应用。
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