本发明公开了一种紫花苜蓿植物铁蛋白的表达纯化方法及其应用。紫花苜蓿植物铁蛋白的表达纯化方法，包括重组表达质粒、重组蛋白的表达和蛋白的纯化；重组表达质粒时，所用质粒为pET‑20b(+)，将紫花苜蓿植物铁蛋白基因序列克隆至pET‑20b(+)质粒的NdeI和XhoI酶切位点之间，得含目的基因的重组质粒。本发明紫花苜蓿植物铁蛋白的表达纯化方法，得到的紫花苜蓿植物铁蛋白呈球形笼状结构，分子量约为28kDa，直径约为12±0.5nm，水溶性好、热力学稳定性高，分散均一。作为一种新型的植物铁蛋白，为生物活性物水溶性、稳定性和生物利用度等的提高，提供了一种新型纳米载体，在食品、医疗、保健等方面有良好的应用前景，具有很高的应用价值。