本发明公开了一种富集分离纯化葵花籽油中亚油酸的方法，包括如下步骤：取葵花籽油置于烧杯中，搅拌同时加热升温,加入氢氧化钠溶液进行皂化，得皂化物；向皂化物中滴加稀硫酸进行酸化，得酸化溶液；将酸化溶液静置分层，洗涤油层直至中性，再将其静置分层，将油液离心得混合脂肪酸；向尿素中加入乙醇混匀，回流直至尿素溶解，再加入混合脂肪酸混匀，继续回流得混合液；将混合液冷却包合后，收集滤液蒸发除去乙醇，用稀硫酸调节pH，得酸化混合液；加入石油醚萃取后收集有机相，水洗有机相至中性，脱水抽滤收集滤液蒸发除去石油醚，即得产品亚油酸。该富集分离纯化葵花籽油中亚油酸的方法，工艺安全，制备便捷。