本发明公开了一种细胞质与细胞核蛋白的提取试剂盒，属于蛋白提取试剂领域。本发明的试剂盒由提取试剂A和提取试剂B两部分组成，所述提取试剂A含有10‑20mmol/L HEPES、10‑15mmol/L KCl、1.5‑2mmol/L MgCl2、0.5％‑0.8％(体积比)NP‑40、0.5‑1mmol/LAEBSF、1‑2mmol/L Na3Vo4、10‑20mmol/L NaF、0.5‑2μg/ml Aprotinin；提取试剂B含有20‑25mmol/LHEPES、400‑450mmol/L NaCl、0.5‑1.3mmol/L EDTA、0.5‑1mmol/L EGTA、0.5‑1mmol/LAEBSF、20‑100μmol/L Leupeptin、10‑20μmol//L Pepstatin A、1‑2μg/mL Aprotinin。本发明的试剂盒能够快速简便地实现细胞质与细胞核蛋白的提取，应用前景良好。