本发明提供了一种新型冠状病毒的全基因组的扩增引物、试剂盒及一步富集及建库方法，本发明通过设计75对引物，实现一步法完成新型冠状病毒全基因组的富集，避免转管或过多的操作步骤引起的污染，测序后的数据可以覆盖新型冠状病毒10000倍以上。本发明通过引物及其引物的配比，可以提升测序数据均一性，以便于降低测序成本和提高富集成功率。本发明通过对第一次PCR程序的优化，将富集扩增中的循环数降低，减少了非特异性扩增，提高测序数据利用率。