本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种分离鉴定酒糟中环肽和环肽乙酯的方法。针对现有技术中还未见有能够有效分离鉴定酒糟中的环肽和环肽乙酯的方法，无法为研究白酒中的环肽成分提供依据的问题，本发明提供了一种分离鉴定酒糟中环肽和环肽乙酯的方法，利用液液萃取、硅胶柱层析等前处理手段，提取分离酒糟中的环肽和环肽乙酯，通过高分辨的高效液相色谱‑四极杆飞行时间质谱联用技术，以质荷比、同位素相对丰度、同位素比例等的相似度以及二级质谱特征离子为依据，鉴定环肽和环肽乙酯。本发明方法定性解析出酒糟中的新化合物环肽和环肽乙酯，为更多此类化合物的开发和应用提供技术支持。