本发明公开了一种NK免疫细胞体外扩增的方法，包括肝素抗凝常规采血、分离外周血淋巴细胞血、制备NK免疫细胞培养基、分离原始NK免疫细胞、原始NK免疫细胞培养、诱导原始NK免疫细胞和NK免疫细胞扩增。利用特殊成分的培养基，不需要像传统慢慢培养NK免疫细胞的方法，提高NK免疫细胞的活性，极大降低了由于长期体外培养可能出现的细胞活力减弱、微生物污染等事件的发生率，对培养后的原始NK免疫细胞诱导剂为PMA+ionomycin，强烈活化T细胞，配合蛋白转运抑制剂使高浓度的细胞因子停留在胞内，易于用抗体和流式进行检测，同时其培养环境为透气细胞培养袋使其内外可以进行气体交换，确保细胞的生存环境安全。