本发明涉及生物检测领域，本发明公开了一种能产生抗卡痛单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法和应用。该杂交瘤细胞株命名为Kratom11B7，已于2021年1月31日保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏号为CCTCCNO：C202146。其制备方法包括：步骤1：帽柱木碱完全抗原的制备；步骤2：7羟基帽柱木碱完全抗原的制备；步骤3：杂交瘤细胞株的制备：用帽柱木碱完全抗原和7羟基帽柱木碱完全抗原共同免疫小鼠。本发明杂交瘤细胞株Kratom11B7分泌产量高，分泌得到的抗卡痛单克隆抗体具有高亲和力、高特异性、高灵敏度特点。本发明采用连续免疫法，可有效节省抗原用量、缩短免疫时间。